色譜法的分類和流出曲線相關概念說明

一、色譜法的分類

色譜法是生命科學、材料科學、環境科學等科學領域的重要分析手段，在藥物分析中有著極為重要的地位，各國藥典都收載了許多藥物的色譜分析方法。《中華人民共和國藥典》2015年版也不例外：收載了上千個藥品用色譜法進行純度檢查、定性鑒別或含量測定。

色譜柱中固定不變的物質是固定相，攜帶樣品向前流動的是流動相，色譜類型較多，從不同角度可以有不同的分類方法：

1、按流動相和固定相所處狀態分類：

流動相為氣體的稱為氣相色譜，流動相為液體的稱為液相色譜。固定相為固體的可分為氣固色譜(GSC)或液固色譜（LSC），固定相為液體的有氣液色譜（GLC）或液液色譜（LLC）。

2、按固定相的形態分類：可分為柱色譜法、平面色譜法，如，紙色譜法、薄層色譜法等。

3、按分離過程的機制分類：可分為分配色譜法、吸附色譜法、離子交換色譜法和空間排阻色譜法等類型，后兩者只存在于液相色譜中。

另外，還有其他分離機制的色譜方法，如，毛細管電泳法，根據組分的電泳速度差異而實現分離。

二、色譜流出曲線與有關概念

（一）色譜流出曲線和色譜峰：

1、色譜流出曲線：在色譜分析中,樣品流經色譜柱和檢測器,所得到的信號-時間曲線,稱為色譜流出曲線(elution profile),又稱色譜圖。

2、基線：在操作條件下，沒有組分流出、僅有流動相通過檢測器系統時所形成的流出曲線。穩定的基線應是一條平行于橫軸的直線，如圖所示。基線反映儀器（主要是檢測器）的噪聲隨時間的變化。

3、色譜峰：流出曲線上的突起部分，正常的色譜峰為正態分布曲線，曲線有最高點，以此點的橫坐標為中心，曲線對稱的向兩側快速、單調下降。

一種組分的色譜峰可用峰高或峰面積（用于定量）、峰位（用保留值表示，用于定性）及峰寬（用于衡量柱效）說明。

色譜法的分類和流出曲線相關概念說明(圖1)

（二）保留值：

1、保留時間（retention time）:色譜圖橫軸上從進樣開始到某個組分的色譜峰頂點的時間間隔為該組分的保留時間。

2、死時間：不被固定相保留的組分，從進樣到出現峰極大值時的時間間隔。

3、調整保留時間：組分被固定相滯留的時間。

4、保留體積：從進樣開始到某個組分在柱后出現濃度極大時，所需通過色譜柱的流動相體積，單位為mL。

5、死體積：不被固定相保留的組分通過色譜柱所消耗的流動相的體積。

6、調整保留體積：保留體積減去死體積。

7、相對保留值：兩組分的調整保留值之比，也是色譜系統的選擇性指標。

（三）色譜峰高和峰面積：

1、峰高（peak height, h）：色譜峰頂點至基線的距離。

2、峰面積（peak area, A）：色譜曲線與基線間包圍的面積。

（四）色譜峰區域寬度：

1、標準差：正態色譜流出曲線上兩拐點間距離之半。

2、半峰寬：峰高一半處的峰寬。

3、峰寬：通過色譜峰兩拐點作切線在基線上所截得的距離。

（五）分離度：又稱分辨率或分辨度，它是色譜圖中相鄰兩峰分離程度的量度。