液相色譜儀分析時如何選擇合適的色譜柱

液相色譜柱有不同的長度、內徑和類型等，我們在做色譜分析時應如何進行選擇呢？

1、色譜柱的長度和內徑

對于色譜柱的長度和內徑，可以基于我們需要分析物質的復雜程度來選擇。兩支同樣填料的色譜柱，柱長越短，分離時間越快，分辨率會更好，同時壓力也將更大，可結合樣品的復雜性和希望分離的時間來選擇合適的柱長。對于色譜柱的內徑，窄徑柱可提高柱的靈敏度，并可明顯降低溶劑的使用量。寬徑柱可以將系統死體積的影響降到最低，載樣量高，抗污染。

想用不同內徑和長度的柱子來進行色譜方法轉移，該怎么調整色譜條件呢？對不同內徑和長度的色譜柱，我們可以使用以下方法來轉換進樣量和流速：

2、苯基柱，氰基柱的適用情況

苯基柱可用于含苯環的芳香族化合物的測定，具有較高的選擇性。氰基柱/CN柱可作為一個保留能力最弱的反相柱使用，也可作為一個活性降低的正相柱使用。

3、要提高分離度時選擇色譜柱的方法

多個樣品不好分離的時候，該怎么通過選擇合適的柱子來提高分離度呢？提高分離度可從三個主要影響因素來考慮：柱效、選擇性和保留因子。可通過減小填料粒徑和增加柱長提高柱效。選擇性和固定相選擇以及pH條件有關，通過選擇合適的色譜柱和合適的pH，可以提高選擇性。保留因子主要與流動相組成和比例有關，其次流動相pH和離子強度影響目標物存在狀態，也會影響保留因子。有時候適當延長出峰時間增加保留因子，也可提高分離度。

4、測定多肽選用的色譜柱

分子量不高的多肽一般選用常規C18或C8柱就能測定，也有用離子交換柱、水性柱和HILIC親水作用柱。若流動相中含有三氯乙酸這類酸性添加劑，建議還是使用耐受低pH的色譜柱。

5、根據樣品特點進行選擇

（1）樣品是極性的且弱酸性的，,可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測，即要選擇（2）如果樣品極性太強或酸性太強，可以選擇CN，NH2，硅膠柱，HILIC(親水色譜)，也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。

（3）若樣品是堿性的，可選擇高純硅膠柱或一些經過修飾的C18柱(如極性嵌入技術或堿去活技術等)，他們都會減少堿性化合物的拖尾，一般會選擇中性或偏堿的條件下做，因為這樣可增加堿性樣品的保留。

（4）如果堿性化合物的極性太強或堿性太強，可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測，或者選用HILIC色譜柱、強離子交換柱和C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。